Materiales de referencia y comparaciones interlaboratorios
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(Colilert
TM
y Colisure
TM
),NMP y Petrifilm.Los resultados
con mayor exactitud fueron obtenidos con Petrifilm y
conteo estándar de placas [21]. Los autores destacan
que el tipo de coliforme empleada y el método utili-
zado para su cuantificación van a tener un importante
efecto en los porcentajes de recuperación bacteriana
en las muestras de agua y finalmente dan énfasis en
que los métodos utilizados de forma rutinaria en los
laboratorios de microbiología para la cuantificación de
coliformes, tales como FM y NMP, producen resultados
con alta variabilidad [21].
VII. Laboratorio productor de Materiales de Refe-
rencia microbiológicos
Hasta la fecha existe solo un laboratorio acreditado
bajo la guía ISO 34 en el marco de materiales de refe-
rencia para microbiología. El acreditado es la empresa
Australiana BTF Ltd., con el producto BioBall
TM
bacte-
rias. Este es el material de referencia microbiológico
más preciso hasta la fecha. Además de su fácil uso, es
de gran ayuda para la normalización de los ensayos uti-
lizados en el área biológica (fig. 5). Estas suspensiones
bacterianas presentan un certificado de calidad (www.
btfbio.com) con un promedio de 28-33 unidades for-
madoras de colonias y con una desviación estándar ‹ 3
[21]. Finalmente, BioBall
TM
puede ser utilizado para las
siguientes aplicaciones: validación de métodos, con-
trol de calidad, evaluación de cumplimientos de requi-
sitos de una acreditación, normalización de protoco-
los de laboratorio, entre otros. Hasta el momento BTF
tiene disponible como material de referencia especies
de los géneros Salmonella, Bacillus, Listeria, Escherichia,
Enterobacter, Enterococcus y Staphylococcus.
VIII. Conclusiones
Es indudable la importancia que tiene la adecuada
determinación de microorganismos patógenos tales
como las bacterias del tipo coliformes.La confiabilidad
y calidad de los resultados en la cuantificación de mi-
croorganismos se incrementa con la implementación
de un sistema de control de calidad efectivo.
En la actualidad existen algunos métodos más sofisti-
cados y sensibles para analizar la pureza de las cepas
bacterianas alternativos a las pruebas bioquímicas
tradicionales, los que permitirían disminuir el tiempo
empleado en el laboratorio para la verificación de las cepas de refe-
rencia, lo que es un paso importante para la mantención adecuada de
cepas que puedan ser usadas como controles en los ensayos para la
determinación de coliformes.
Para la determinación de bacterias del tipo coliformes existen diversas
metodologías, cada una de las cuales tienen sus ventajas y desventa-
jas, sin embargo, vale la pena preguntarnos si los métodos utilizados
actualmente para la detección de bacterias coliformes son confiables y
de qué manera podemos aumentar esa confiabilidad en los resultados.
Una aproximación es el desarrollo de nuevas y mejores metodologías.
En este sentido los métodos moleculares aumentan la especificidad de
detección y reducen el tiempo de los análisis. Pero, a pesar de que di-
versos métodos se han desarrollado en el último tiempo, sólo algunos
tienen el potencial para convertirse en un método de referencia para
detección de coliformes en las muestras de agua, debido a las comple-
jidades técnicas y costos que deben asumir los laboratorios. Cualquie-
ra sea el caso, cobra especial importancia la validación de la técnica a
emplear, por lo que disponer de un material de referencia en esta área
puede ser fundamental.
Dentro de este marco el uso de materiales de referencia en el área de
microbiología actualmente es limitado por varias razones, entre ellas,
su disponibilidad y los requisitos propios que debe cumplir unmaterial
de referencia en cuanto a estabilidad y homogeneidad.Esto concuerda
con desarrollos recientes en el área. Los factores determinantes para
la viabilidad de este tipo de materiales son relativamente conocidos,
entre los que se destacan la cantidad de bacterias, medios de cultivo,
temperatura y tiempo de almacenaje. Además, estos factores van a
depender directamente de la metodología empleada para asegurar la
viabilidad de la cepa bacteriana utilizada para la producción del mate-
rial de referencia.
Dadas las características de los materiales de referencia microbiológi-
cos existentes se requiere de métodos cuantitativos. Dentro del espec-
tro de técnicas utilizadas actualmente en la determinación de bacte-
rias del tipo coliformes en aguas, la técnica de filtración por membrana
se sugiere como una buena alternativa.
IX. Agradecimientos
Los autores agradecen al Dr. Nicolás Guiliani, del Laboratorio de Mi-
crobiología Molecular y Biotecnología, de la Facultad de Ciencias de la
Universidad de Chile, por los aportes realizados al presente trabajo.
X. Referencias
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of VITEK 2 rapid identification and susceptibility testing system
against gram-negative clinical isolates. J Clin Microbiol. 39: 2964-
2966.
Figura 5. Material de referencia BioBall
TM
.
El material de referencia es una pequeña
esfera liofilizada que viene dentro
de un vial, y con un manejo simple
puede ser cuantificado con un ensayo
específico, en este caso se muestra
una cuantificación por plaqueo simple.
(imagen tomada de
com/product.php?nav=BioBall).
