Materiales de referencia y comparaciones interlaboratorios
57
DESARROLLO DE MATERIALES DE REFERENCIA
PARA ANÁLISIS MICROBIOLÓGICOS:
DETERMINACIÓN DE BACTERIAS COLIFORMES EN
AGUA, UN CASO DE ESTUDIO
Francisco Remonsellez (a) y Marly López (b)
(a) Laboratorio de Microbiología Molecular y Biotecnología,
Facultad de Ciencias,Universidad de Chile,
Casilla 653,Santiago,Chile.
(b) Centro Nacional del Medio Ambiente (CENMA)
Avenida Larraín 9975,La Reina,Santiago,Chile
Resumen.
La detección de bacterias coliformes es usada como un indicador de la calidad del agua debido a que la protección de la salud exige la
ausencia de microorganismos patógenos en estas fuentes.A pesar de tener grandes limitaciones, los métodos más utilizados para la cuantificación de
coliformes son la fermentación en tubos múltiples (FTM) y la filtración en membrana (FM).Nuevos métodos enzimáticos y moleculares,que aumentan
la especificidad de detección y reducen el tiempo de los análisis, han sido desarrollados para la detección de coliformes, pero deben ser validados por
cada laboratorio para ser utilizados.Para asegurar la validez de los datos obtenidos, los materiales de referencia utilizados para el control de calidad de
análisis en ensayos microbiológicos tienen que presentar una calidad adicional debido a que el objeto de estudio son organismos vivos.Los parámetros
claves para la producción de materiales de referencia en microbiología son el número de bacterias, los medios de cultivos utilizados, la temperatura y el
tiempo de almacenaje.Estos parámetros dependen principalmente del método utilizado para mantener su viabilidad y de la especie bacteriana.La liofi-
lización de suspensiones bacterianas es el método más utilizado para la producción de materiales de referencia,debido a que los liofilizados mantienen
la viabilidad de las bacterias, son de fácil manipulación y pueden mantenerse almacenados por largos períodos de tiempo. A nivel mundial, según la
información consultada solo existe un laboratorio acreditado para la producción del material de referencia para ensayos microbiológicos.
Palabras claves:
Material de referencia,coliformes,aseguramiento de la calidad.
DEVELOPMENT OFTHE REFERENCE MATERIALS FOR MICROBIOLOGICAL ANALYSES:DETERMINATION COLIFORMS BACTERIA INWATER,A CASE
OF STUDY
Summary.
The detection of coliforms bacteria is used like an indicator of the water quality because of the health protection demands the absen-
ce of pathogenic microorganisms in these sources. In spite of to have great limitations, more used methods to coliforms quantification are multi-
ple tube fermentation (MTF) and membrane filter (MF) techniques. New enzymatic and molecular methods, that increase the detection specificity
and reduce the analyses time, have been developed to coliforms detection, but they must to be validated by each laboratory to be used. In order
to assure the validity of collected data, the reference materials used for quality control on microbiological tests have to present an additional qua-
lity, because the study objects are alive organisms. The key parameters to the reference materials production in microbiology are the number
of bacteria, means cultures used, temperature and time of storage. These paramaters depend mainly of the method used to maintain their viabili-
ty and the bacterial especie. The lyophilization of bacterial suspensions is the more used method for the production of reference materials, becau-
se the lyophilized ones maintain the bacterial viability, are of easy manipulation and can stay stored by long periods of time. In the world and ac-
cording to the consulted information, only exist one accredited laboratory for the production of reference material for microbiological tests.
Keywords.
Reference Material,coliforms,quality assurance.
I. Introducción
La protección de la salud pública y ambiental requiere de agua libre de bacterias patógenas, más aún cuando se
trata del agua potable. Dentro de los patógenos más comúnmente encontrados en las fuentes de agua se en-
cuentran las bacterias entéricas. La actividad humana es una de las principales fuentes de organismos patógenos,
como consecuencia de esto, las fuentes de contaminación fecal debido a actividades humanas son estrictamente
controladas [1].
Las bacterias del tipo coliformes han sido utilizadas ampliamente como indicadores de la calidad del agua y tie-
nen una relación histórica con los conceptos de protección en salud pública. Actualmente existen diversos méto-
dos, tanto cualitativos como cuantitativos para determinar su presencia en muestras de agua [1]. Al igual que los
ensayos del tipo químico, los ensayos microbiológicos requieren de un estricto control, de modo de asegurar la
validez de los resultados. Uno de los mayores problemas descritos al respecto responde al hecho de que el objeto
de estudio son organismos vivos [1, 2]. Existe consenso en que la forma de asegurar la calidad de los resultados y
demostrar la competencia técnica de un laboratorio se efectúa mediante la obtención de una acreditación bajo la
norma ISO-IEC 17025.Sin embargo al operar bajo un sistema de calidad con exigencias técnicas es necesario efec-
tuar una serie de actividades enmarcadas dentro del control de la calidad. En general, para los análisis microbioló-
gicos se utilizan cepas de referencia de colecciones nacionales o internacionales reconocidas, para demostrar que
los medios de cultivos y reactivos poseen características aceptables,para validar métodos y para realizar controles
de calidad internos durante la ejecución de los ensayos como una forma de asegurar la trazabilidad de las me-
didas [3]. El uso de materiales de referencia específicos para el análisis de coliformes en aguas en este ámbito es
limitado, lo que plantea un desafío para el área microbiológica de modo de dar confianza a los ensayos utilizados
para la cuantificación de microorganismos, sobre todo cuando los resultados generados tienen implicancias en la
salud de la población.En este trabajo se destacan aspectos relevantes sobre la determinación de bacterias colifor-
mes, como también del uso y disponibilidad de materiales de referencias para este tipo de análisis.
II. Descripción y caracterización de las bacterias coliformes
El grupo de las coliformes incluye una gran diversidad en término de género y especies, pero todas ellas perte-
necen a la familia Enterobactericeae [1, 4, 5]. Estas bacterias son Gram-negativos, anaerobios facultativos y qui-
miorganotróficos, con un metabolismo de respiración y fermentación. Muchas especies pertenecientes a esta
familia crecen óptimamente a 37
o
C. D-Glucosa y otros carbohidratos son catabolizados con producción de ácido
