III Simposio de Postgrado 2025: Ingeniería, ciencia e innovación

11 202 Módulo Química, Biotecnología y Materiales Expresión heteróloga y análisis funcional de enzimas candidatas a degradar policaprolactona *E-mail: evelyn.braun@ug.uchile.cl ¹ Departamento de Ingeniería Química, Biotecnología y Materiales, Universidad de Chile Evelyn Braun Muñoz ¹* Carol Jara Lagos ¹ Luis Castro ¹ Barbara Andrews ¹ Juan Asenjo ¹ La contaminación asociada al uso de plásticos es un problema ambiental que no se detiene. En este contexto, el uso de plásticos biodegradables aparece como una opción para disminuir el tiempo de permanencia de estos materiales en el medio. La poli( ε -caprolactona) (PCL) es un poliéster alifático de degradación len- ta y de amplio uso biomédico, este se cla- sifica dentro de los plásticos biodegrada - bles por ser susceptible a hidrólisis bajo la acción de ciertos microorganismos. Este trabajo busca evaluar la actividad degra- dativa de cinco enzimas recombinantes, candidatas a degradar PCL. En primer lugar, se identificaron y carac - terizaron de forma preliminar cinco en- zimas obtenidas de diferentes aislados microbianos del Desierto de Atacama. Las secuencias fueron seleccionadas mediante un análisis bioinformático de homología con poliesterasas conocidas que poseen actividad sobre PCL. Luego, se diseñaron y sintetizaron vectores bac- terianos pET-22b(+) con las respectivas secuencias de interés y una etiqueta de histidina (His-tag) para posterior purifica - ción. Los vectores fueron clonados me- diante electroporación en la cepa com- petente de Escherichia coli NiCo21(DE3). La expresión enzimática fue inducida con 0.5 mM de Isopropil β -D-1-tiogalacto- piranósido (IPTG), a 25°C durante 20 ho - ras. Las proteínas fueron purificadas me - diante Cromatografía Líquida Rápida de Proteínas (FPLC), utilizando una columna de níquel con afinidad a His-tag. Finalmente, se evaluó la actividad es- terasa de las enzimas utilizando como sustrato sintético p-nitrofenil butirato (pNPB), un éster cromogénico de 4 car- bonos que permite cuantificar la ruptura de enlaces éster midiendo absorbancia a 410 nm en espectrofotómetro. De las cinco enzimas analizadas, solo una presentó actividad esterasa detectable. Se determinaron condiciones óptimas de actividad para esta enzima, modificando temperatura y pH. En trabajo posterior se realizará caracterización bioquímica de la enzima y ensayos de actividad en condiciones óptimas con el sustrato real. Este trabajo permite ampliar las herra- mientas para aplicar estrategias biotecno- lógicas en la biorremediación de plásticos. Resumen __Referencias [1] Ospina Betancourth, M. (2013). Caracterización preliminar de una enzima con actividad lipolítica obtenida de una librería metagenómica. Uniandes. Disponible en: https://hdl.handle. net/1992/25300 [2] Mohamed, R. M., & Yusoh, K. (2015). A Review on the Recent Research of Polycaprolactone (PCL). Advanced Materials Research, 1134, 249–255. https://doi.org/10.4028/ www.scientific.net/ amr.1134.249